мелкогранулярный тип свечения ядра 1 160 что это значит
Антинуклеарный фактор (АНФ)
Д
авно я хотела написать про антинуклеарный фактор, но меня все время что-то останавливало. Почему? Ну потому что писать об этом — это пытаться объять необъятное, а краткость — явно не сестра моего таланта)))
АНФ-это не одно антитело!
Метод выявления АНФ был разработан Таном (1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (вы могли видеть это название в бланке анализа). Это клеточная линия получена из опухоли гортани человека (аденокарциномы). Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ) с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ.
В качестве субстратов могут применяться и другие клеточные линии (см карусель), однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линия Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. В англоязычной литературе иногда этот метод обозначают как FANA(Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).
Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории называют тесты, как основанные на методах иммуноферментного и иммунохимическом анализе, так и метод иммунофлюоресценции.
Антинуклеарный фактор (АНФ) — это антитела, обнаруженные иммунофлюресцентным методом.
Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленных другими классами иммуноглобулинов не имеет самостоятельного значения.
Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, которое обладает четкой флюоресценцией (свечением) ядер клеток. При использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80, в этом случае в норме титры АНФ менее 1:160. Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом х2 (1:160-1:320 — 1:640 — 1:1280 – 1:2560 – 1:5120 и т.д.).
На фоне обострения заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры могут снижаться до 1:160-1:320.
Балльная оценка результатов выявления («в крестах» +++) позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным❌
Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнять присутствие в сыворотке аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.
ТИПЫ СВЕЧЕНИЯ ЯДРА
Тип свечения ядра — одна из ключевых характеристик при выявлении АНФ. Каждая разновидность антинуклеарных антител (ANA) имеет конкретные мишени в клетке и отражает взаимодействие сыворотки больного с структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в крови, на основе чего, можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей антител, которые имеются в данной сыворотке. Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ.
Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, однако для клинической практики достаточно выделить основные. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.
При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с теми антигенами, которые распределены в ядре диффузно, т.е. входят в состав хроматина.
За счёт чего? Антитела против нуклеосом, ДНК, гистонов.
Когда? У больных с СКВ и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией.
Часто обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз СКВ.
Периферический тип свечения могут выделять отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно при СКВ, заболеваниях печени.
Гранулярный тип (крапчатый, сетчатый) является наиболее частым встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим.
За счёт чего? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA.
Когда? СКВ, болезнь/синдром Шегрена, склеродермия, дерматомиозит/полимиозит, РА и ряда других болезней. Низкие титры (1:160-1:320) АНФ с гранулярным типом свечения могут быть в сыворотках крови у клинически здоровых лиц БЕЗ признаков системного заболевания.
Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз смешанного заболевания соединительной ткани и требует дообследования для выявления RNPантигена.
Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции.
За счёт чего? PHК полимераза 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.
Когда? Склеродермия и ее разновидности.
Центромерный тип отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST-синдроме (вариант склеродермии).
Цитоплазматический тип свечения.
За счёт чего? Антитела к тРНК–синтетазам, в частности Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: при аутоиммунном гепатите, при первичном билиарном циррозе.
Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения. Антитела к Scl-70 дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 — светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках.
Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70.
Иногда в низких разведениях преобладает один тип свечения, например гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА.
Мелкогранулярный тип свечения ядра 1 160 что это значит
Общая информация об исследовании
Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.
Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.
При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.
При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.
Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.
Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.
Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).
Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.
Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U3RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.
Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.
Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.
Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.
У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.
В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Мелкогранулярный тип свечения ядра 1 160 что это значит
Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела – один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.
АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).
Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).
Непрямая реакция иммунофлюоресценции.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.
Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.
При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.
При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.
Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.
Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.
Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).
Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.
Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U3RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.
Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.
Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.
Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.
У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.
В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Титр: Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:
Тип свечения
Для чего он характерен
Для СКВ, лекарственной волчанки, системной склеродермии, хронического активного гепатита
Для СКВ, синдрома Шегрена, смешанной болезни соединительной ткани, ревматоидного артрита
Для полимиозита/дерматомиозита, склеродермии, синдрома Шегрена, СКВ
Для CREST-синдрома (кальциноза кожи, синдрома Рейно, эзофагеальной дисфункции, склеродактилии, телеангиоэктазии)
Для дерматомиозита/полимиозита, аутоиммунного заболевания печени, первичного билиарного цирроза
Что может влиять на результат?
Кто назначает исследование?
Антинуклеарный фактор (АНФ) и антитела (АНА): понятие, исследование и показания к нему, причины обнаружения
Открытие антинуклеарных антител (АНА), вошедшее в число главных достижений иммунологической науки, дало клинической лабораторной диагностике новые возможности для выявления ряда патологических состояний. Анализ крови, определяющий антинуклеарный фактор (АНФ), входит в группу наиболее востребованных серологических исследований и находится в числе «золотых стандартов» диагностики аутоиммунных процессов, которые приводят к развитию системной патологии соединительной ткани. Данный тест при наличии подозрительных симптомов позволяет регистрировать изменения соединительной ткани на самой ранней стадии патологического (аутоиммунного) процесса.
Антинуклерные антитела
Системные заболевания соединительной ткани (СЗСТ) возникают на почве агрессии иммунной системы против собственных антигенов (аутоантигенов), что сопровождается выработкой аутоантител.
Аутоантитела, направленные против растворимых компонентов клеточного ядра (рибонуклеопротеинов), составляют целое семейство (более 200 разновидностей) антинуклеарных (антиядерных) антител (АНА). Семейство это носит название – антинуклеарный фактор или АНФ, хотя, следует заметить, с названиями иной раз возникает путаница, поскольку все же под термином «антинуклеарный фактор» подразумевают исследование сыворотки, обнаруживающее антинуклеарные антитела с участием метода непрямой иммунофлюоресценции (см. ниже).
И все же в настоящее время чаще принято говорить об антинуклерных антителах и методах их обнаружения. В норме АНА в организме не образуются, поэтому и нормы, как таковой, не существует.
Антинуклеарные антитела легко вступают во взаимодействие со всеми составляющими структурами клетки, запуская воспалительные реакции в органах и тканях, что отражается на их функциональных способностях. Естественно, у всех аутоиммунных заболеваний можно найти общие симптомы:
Однако при этом каждая аутоиммунная болезнь наделена и своими специфическими симптомами.
Чаще всего антинуклеарный фактор назначается и выявляется в высоких титрах при системной красной волчанке (СКВ), присутствуя в сыворотке крови почти у всех пациентов (более 90%). Однако сам позитивный ответ теста не доказывает формирование патологии, у людей здоровых людей, превосходно себя чувствующих, титр тоже может быть несколько повышен. В данном случае специалист, который проводит исследование, определяет мишени АНА, чтобы впоследствии разработать правильную тактику в плане обследования пациента.
Таблица: встречаемость антинуклеарных антител при различных заболеваниях
Расшифровку исследования проводит специалист в области иммунологии (реже – ревматологии), который хорошо ориентируется в механизме образования антител и может провести дифференциальную диагностику, если в этом возникает необходимость. Для данного анализа самодеятельность абсолютно неуместна.
Причина назначения анализа и факторы, влияющие на результат
Как выше сказано, поиск АНФ в первую очередь находится в зоне внимания иммунолога и ревматолога, правда, врачи других специальностей тоже иной раз проявляют интерес к данному исследованию, однако он уже не столь велик, поскольку назначается тест, прежде всего, в случаях:
Врачи, занятые в области иммунологии и ревматологии используют исследование для:
В иных случаях могут «выскакивать» ложноположительные или ложноотрицательные результаты.
Ложный плюс можно ожидать у пациентов:
Наоборот, ложный минус можно получить при использовании таких гормонов, как дексаметазон, преднизолон, метипред (метилпреднизолон).
Следует заметить, что:
Хотя не особо мнительные люди, случайно пройдя подобное тестирование, могут не придавать своим результатам большого значения, продолжая жить полноценной активной жизнью. Конечно, если не жалуются на свое здоровье. А вот мнительные… Они – наоборот, могут даже и симптомы у себя найти, поэтому подобный анализ крови должен осуществляться только по назначению иммунолога, а не по собственной инициативе пациента.
Методы выявления АНА
Иммунологическая наука к изучению антинуклеарного фактора вплотную подошла к середине прошлого века, а с 1982 года, когда впервые была использована перевиваемая клеточная линия человека HEp-2, ставшая золотым стандартом обнаружения АНА, стали активно дорабатываться и добавляться другие методы. Сейчас иммунология и КДЛ используют несколько методик.
Метод непрямой иммунофлюоресценции , разработанный в самом начале 80-х (1982), на сей день считается наиболее популярным и доступным. Он предполагает участие HEp-2-клеток, извлеченных из опухоли гортани человека. Для определения АНФ выявляются иммуноглобулины класса G (IgG), ибо представители иных классов особой роли не играют. Основа метода – соединение АНА с конкретными ядерными мишенями. Исследование проходит под люминесцентным микроскопом. Расшифровка анализа проводится на основании полученных данных – тип свечения, титр АНА (норма – титр менее 1:160).
Рисунок: типы свечения и диагностические выводы
Метод двойной иммунодиффузии (качественный анализ) требует большой концентрации АНА, поэтому он менее чувствительный, нежели предыдущий метод. Однако данный недостаток с лихвой компенсируется высокой специфичностью. К тому же, он простой, в какой-то специальной аппаратуре не нуждается, как и в применении антигенов высокой очистки. Разновидность иммунодиффузии – контрэлектрофорез также является качественным методом, позволяющим увеличить чувствительность и сократить время проведения исследования.
Иммуноферментный анализ (ИФА) обладает высокой чувствительностью, обеспечивая быстрый и надежный количественный результат в лабораториях небольших медицинских учреждений. Но при всех достоинствах у иммуноферментного анализа тоже есть свои недостатки: он требует контроля качества, поскольку стандартизация тест-систем и отображаемость результатов основаны на качестве данного исследования.
Возможности иммуноблоттинга в плане чувствительности и специфичности превосходят способности всех предыдущих методов. Он отличается умением выявлять сывороточные АТ к антигенам определенного молекулярного веса, что позволяет не только найти редко встречающиеся антинуклеарные антитела, но и дать им полную характеристику. И еще чем хорош иммуноблоттинг: он не нуждается в высокоочищенных антигенах и не требует контрольных и референсных реагентов. Но и этот метод, не глядя на свое превосходство над остальными, рекомендуется использовать не в изолированном виде, а вместе с другими методами (с целью повышения чувствительности).
Когда АНФ повышен
Преимущественно, в уточнении АНФ проявляет потребность подозрение на системную красную волчанку. Между тем, он повышен и при развитии других аутоиммунных состояний, кстати, иногда очень напоминающих СКВ, например:
Но лишь полное, всеобъемлющее обследование пациента может установить малоутешительный диагноз, с которым придется бороться всю дальнейшую жизнь. Или опровергнуть его.
АНФ, симптоматика и прочие лабораторные тесты
Позитивный антинуклеарный фактор обычно предполагает проведение ряда других лабораторных исследований. Конечно, не обходится без общего анализа крови (ОАК), в котором основное внимание направлено на изменение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) – она находится под постоянным контролем (анализ пациенты сдают чаще, нежели сам ОАК). Периодически контролируется РФ (ревматоидный фактор), СРБ (С-реактивный белок – в количественном выражении), АСЛО (антистрептолизин О), антитела к кардиолипиновому антигену (IgG и IgM). Кроме этого, пациенту могут назначаться и более сложные тесты:
Очевидно, как антинуклеарный фактор, так и все АНА могут появляться при многих и, следует заметить, довольно не простых патологических состояниях, поэтому и назначаются эти анализы крови только врачом, способным расшифровать и интерпретировать полученный результат. Само исследование обычно не требует особой подготовки (как любой биохимический тест), кроме того, что пациент должен предупредить, какие лекарственные средства он принимает, чтобы врач обозначил время, когда можно сдавать анализ. И еще: курящим пациентам за полчаса до отбора проб настоятельно рекомендуется расстаться со своей привычкой.